骨髓小粒中有含铁血黄素称细胞外铁;细胞内也含有铁称细胞内铁，其中三价铁离子与分子中蛋白质结合不牢，经处理后游离，可在酸性亚铁氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应而染色。
(1)玻片一定要清洁无污，需经无铁处理。处理方法：新片经清洁液浸泡24h，冲洗后浸入95%乙醇中24h，晾干后再浸在5% HCl中24h，蒸馏水反复浸洗玻片，取出烤干备用。
(2)酸性亚铁氰化钾必须现用现酸。
(3)比较好用盛骨髓那张涂片染色做细胞外铁观察，因这张涂片含骨髓小粒较多。
(4)细胞内铁计数应以中、晚幼红细胞为准。
正常：
细胞外铁为“＋”～“＋＋”；细胞内铁为计数100个幼红细胞，铁粒幼细胞为19～44个。
异常：
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