1.病毒分离 从患者结膜囊内分离病毒，以患病8天阳性率最高(80%)，6～10天次之(67%)，11天后为阴性。
2.血清学检查 以恢复期中和抗体滴度高于急性期4倍以上作为诊断依据。
3.免疫荧光技术
为更快速简便的方法，即在患病高峰(1周左右)取结膜上皮刮片或分泌物涂片，加荧光素标记抗体标记，几乎全部病例均可发现感染的上皮细胞内有病毒抗原存在。
应用电子显微镜技术，对病人的泪液或结膜刮片，在电镜下观察，可直接发现病毒颗粒或病毒抗原，但由于价格昂贵，限制了临床应用。