血液胆碱酯酶可使乙酰胆碱水解生成胆碱和乙酸，终止反应后，剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺作用生成乙酰羟胺，然后在酸性环境中与三氯化铁反应生成棕红色羟肟酸铁络合物。根据其颜色深浅进行比色定量。从而推算出胆碱脂酶活性。
1.氯化乙酰胆碱在空气中易潮解，故需用具盖称量瓶尽快称好。
2.由于本方法是测定剩余的乙酰胆碱而氯化乙酰胆碱易分解，比较好每次测定均能配制标准曲线。当发现氯化乙酰酶储备液浓度低于原浓度而影响测定时需重新配制。
3.水浴温度和保温时间都能影响酶的反应，因此必须严格控制。
4.加三氯化铁溶液显色后，棕红色铁络合物易退色，故应在20分钟内比色完毕。如有大批样品需要分析，可分批加三氯化铁溶液。
5.本方法检测下限为0.024mmol/L;线性范围为0.024～10.00mmol/L;在1.4、4.2、7.0mmol/L时，变异系数分别为12.8%，9.0%，6.4%。
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